五子益肾胶囊中枸杞子、牡丹皮质量标准研究

[摘要] 目的 建立五子益肾胶囊中枸杞子和牡丹皮的质量标准。方法 采用薄层色谱法（TLC），分别对枸杞子和牡丹皮以及其主要有效成分进行定性鉴别。结果 两种药材的色谱斑点清晰可辨，分离度良好，阴性对照无干扰。 结论 所采用标准为五子益肾胶囊中枸杞子和牡丹皮的质量标准提供了科学的依据。

[关键词] 枸杞子；牡丹皮；薄层色谱法；质量标准

[中图分类号] R2 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2015）05（c）-0070-03

五子益肾胶囊是由五味子、枸杞子、菟丝子、车前子以及牡丹皮的十多味中草药提炼而成的具有补肾益精之功效的中成药，其主要用于治疗肾亏引起的阳痿早泄等症状，同时具有补肝益气、填精益髓的等作用[1]。本次研究采用TLC法对其所用的枸杞子和牡丹皮及其有效成分进行定性鉴别，为确定该中成药的质量标准提供可靠依据。

1仪器与试药

日本岛津CS-9000薄层扫描仪；干燥箱；粉碎机；电子天平；10×10（cm）硅胶吸附剂薄层板；60目筛子；实验室器皿（烧杯、量杯、烧瓶等）；牡丹皮对照品、枸杞子对照品、甜菜碱对照品、丹皮酚对照品（中国药品生物制品检定所提供）；五子益肾胶囊由（南京市中医院自制）提供，本次研究所用试剂均为分析纯，水为去离子水。

2方法与结果

2.1枸杞子的TLC鉴别

2.1.1供试品溶液制备 精确称取枸杞子粉末3 g，加入去离子水30 mL溶解煮沸，然后过滤，用三氯甲烷萃取，将所得蒸后的残渣加入甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液备用。

2.1.2对照品溶液制备 精确称取对照样品枸杞子3 g，同法制成对照品溶液。

2.1.3阴性供试品溶液制备 按照配方比例，称取五子益肾胶囊中除枸杞子外其他各味中药，按照制备方法进行加工，将其按照供试品溶液制备方法进行处理，制成阴性供试品溶液。

2.1.4样品鉴别 层析法：照薄层色谱法（参照《中国药典》2005年版第一部附录VIB）试验，分别吸取供试品溶液和对照品溶液5 μL，分别滴于同一块以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，其展开剂选用乙酸乙酯—三氯甲烷—甲酸（3：2：1），进行展开、取出、晾干后置于紫外线灯光下（365 nm）检测。

2.1.5检测结果 通过对比发现，供试品色谱与对照色谱在相应的位置上，呈现相同颜色的荧光斑点，其阴性对照样品则无相应的对照斑点。

2.2枸杞子有效成分甜菜碱的TLC鉴别

2.2.1供试品制备 精确称取枸杞子粉末2 g加入甲醇溶液50 mL置水浴锅中加热50 min后冷却，称定重量后利用甲醇补充失去的分量，充分摇匀，精密抽取过滤液10 mL，过100-200目、内径1 cm、经无水乙醇10 mL预先清洗过的碱性氧化铝柱，然后用无水乙醇80 mL洗脱。将洗脱液与原液融合蒸发烘干后，加水稀释至5 mL，摇匀过滤，作为供试品溶液

2.2.2对照品溶液制备 取甜菜碱样品适量，加入0.5%的盐酸甲醇溶液，制成1：250倍的对照品溶液备用。

2.2.3样品鉴别 薄层色谱法：分别吸取供试品溶液与对照品溶液5 μL和3 μL，点于同一硅胶G薄板上，以丙酮-无水乙醇-盐酸（10：6：1）作为展开剂，展开取出晾干后，放置于60℃烘干箱内加热40 min取出后立即喷洒碘化铋钾溶液，进行扫描[2]。

2.2.4检测结果 通过薄层扫描色谱法，可以准确检测出枸杞子中有效成分甜菜碱的含量，并且斑点显现效果良好。

2.2.5稳定性实验 吸取供试品溶液10μl，分别在配置0、2、4、8、16、24 h时，按照薄层色谱法进行检测，结果证明样品的稳定性基本良好（见表1）。

2.2.6甜菜碱重复性实验 精确抽取同一批次枸杞子粉末样品4份，按照含量测定的方法，进行提取并测定，其RSD值均小于2%（见表2）。

2.2.7甜菜碱准确性实验 利用甜菜碱回收率试验，可以有效验证甜菜碱TLC测定的准确率。精确称取甜菜碱并配置甜菜碱溶液（8.109mg·mL-1），同时吸取对照品溶液1 mL，同时加入容器内，蒸发干燥再次精确称取枸杞子粉末1 g后，放入容器内，并且平行制备3份待用；精确吸取对照品溶液2 mL，加入容器内，再称取枸杞子粉末1 g加入，并且平行制备3份待用；精确吸取对照品溶液4 mL加入容器中，烘干后，加入精确称取的枸杞子粉末2 g，并且平行制备3份；根据甜菜碱含量测定方法进行测定，结果表明甜菜碱TLC测定法具有良好的准确性（见表3）。

2.3牡丹皮的TLC鉴别

2.3.1制备供试品 精确称取牡丹皮粉末1 g，加入10 mL乙醚，做超声处理10 min后，抽取过滤，残渣用乙醚洗涤后，将滤液与洗涤液混合静置，待乙醚挥发后，加入丙酮定容，制成供试品溶液。

2.3.2制备对照品溶液 精确称取牡丹皮对照样品粉末1 g，按照供试品制备的步骤，进行处理，制成对照品溶液。

2.3.2制备阴性对照溶液 按照五子益肾胶囊的配方比例，称取除牡丹皮外其他中药成分，按照制备方法制备后，将其按照供试品溶液制备方法进行处理，制成阴性供试品溶液

2.3.3样品鉴别 分别取供试品和对照溶液各1 μL滴于同一硅胶G薄层板上，将点样板于干燥处放置10 min后，放入已经添加展开剂的展开缸中饱和，饱和10 min后，放入以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂的容器中展开，取出晾干后，喷洒5%香草醛硫酸溶液，烘干至105℃至斑点显现清晰。

2.3.4检测结果 对比两组色谱斑点显现形态、位置基本相同，同时进行阴性对照显示无干扰。

2.4牡丹皮有效成分丹皮酚的TLC鉴别

2.4.1制备供试品 精确称取牡丹皮粉末1 g，加入10 mL乙醚，震荡处理10 min后，抽取过滤，残渣用乙醚洗涤后，将滤液与洗涤液混合静置，待乙醚挥发后，加入丙酮定容，制成供试品溶液[3]。

2.4.2制备对照品 精确称取丹皮酚对照品样品，按照1：500的比例加入丙酮溶液，制成对照品溶液。

2.4.3样品鉴别 分别吸取供试品溶液和对照品溶液5 μL滴于同一硅胶G薄层板上，然后以环己烷-乙酸乙酯 （3：1）为展开剂，展开取出晾干后，喷洒盐酸酸性为5%的三氯化铁乙醇溶液，在烘干炉内加热至斑点显现。

2.4.4检测结果 通过对比可以发现，两组色谱斑点显现的形态、位置基本相同。

3讨论

枸杞子的主要化学成分为甜菜碱、多糖、有机酸、黄酮、胡萝卜素[4-5]等。

本次研究提取条件与薄层鉴别参照《中国药典》2005年第一版枸杞子项目下的TLC鉴别方法，本次研究提取条件采用三氯甲烷萃取，通过乙酸乙酯—三氯甲烷—甲酸（3：2：1）和丙酮-无水乙醇-盐酸（10：6：1）分别作为展开剂，对枸杞子以及其有效成分甜菜碱进行研究，研究结果表明其斑点分离理想，同时通过与对照药材图谱对比发现，两者对应性良好，适宜作为枸杞的质量鉴定标准方法。

牡丹皮主要有效成分为丹皮酚以及芍药苷，本次研究参考《中国药典》2005年第一版白芍鉴别项目下的鉴别方法，对研究结果进行鉴别，结果表明，本次研究所用实验样品色谱与对照药材的色谱对应性良好，并且其阴性对照无干扰，证明此方法可作为牡丹皮的质量鉴别方法。

4结论

本次通过薄层色谱法对五子益肾胶囊中枸杞子和牡丹皮的质量标准进行研究，通过有效的理论依据，为其质量标准的确定提供了可靠的参考依据。

[参考文献]

[1] 梁学政，唐勇琛，陈惠红，丘琴，黄晓玉，甄汉深.五子补肾胶囊的质量标准[J].中国药师，2013，16（9）：1322-1325.

[2] 徐秀珍，齐喜红.薄层扫描法测定枸杞子中甜菜碱的含量[J].中成药，2005，27（8）：941-943.

[3] 肖霞，曹俊凯.牡丹皮中丹皮酚的薄层层析鉴别[J].中国实用医药，2014，9（26）：256-257.

[4] 李磊，吴启勋.不同产地枸杞子质量的综合评价[J].青海师范大学学报，2007（4）.

[5] 李瑞萍.补肾丸中枸杞子与关黄柏的TLC鉴别研究[J].内蒙古中医药，2010（3）.

（收稿日期：2015-00-00）