HPLC法测益康胶囊中非法添加格列本脲的含量
[摘要] 目的 用HPLC法测益康胶囊中非法添加格列本脲的含量。方法 以格列本脲对照品作对照，采用HPLC法测定益康胶囊中非法添加的格列本脲含量。结果 在优化色谱条件下，益康胶囊中含有格列本脲，其中的格列本脲线性范围1.0～50 μg。回归方程为：Y=390.1006 814X-13.531 980 3 r=0.999 9。含量测定的回收率为：98.34% RSD = 0.798 2%。结论 所建立的方法专属性强，操作简便，结果准确，重现性好，适用于对益康胶囊中非法添加的格列本脲含量的测定。
[关键词] 高效液相色谱法;格列本脲;益康胶囊;非法添加;含量测定
[中图分类号] R19 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2016）10（a）-0079-03
HPLC Method in Measuring the Content of Illegal Additive of Glibenclamide in Yikang Capsule
WANG Zhuo-yan1， DU Yan2， ZHAO Yun-he1
1.Food and Drug Inspection Institute， Baicheng， Jilin Province， 137000 China;2.Food and Drug Inspection Institute， Jilin， Jilin Province， 132000 China
[Abstract] Objective To measure the content of illegal additive of glibenclamide in yikang capsule by HPLC method. Methods The content of illegal additive of glibenclamide in yikang capsule was measured by HPLC method taking the glibenclamide control articles for control. Results Under the optimized chromatography condition， yikang capsule included the glibenclamide， the glibenclamide linearity range was from 1.0 μg to 50 μg， and the regression equation was Y= 390.100 681 4X-13.531 980 3 r=0.999 9， the recycle rate of content measure was 98.34% RSD= 0.7982%. Conclusion The specificity of the established method is strong with easy operation， accurate result and good repeatability， which is suitable for the measurement of illegal additive of glibenclamide in yikang capsule.
[Key words] High performance liquid chromatography; Glibenclamide; Yikang capsule; Illegal additive; Content measurement
益康胶囊是由山药，肉桂，黄精，葛根，大麦芽，苦瓜精等组成的胶囊剂，主要成份是黄酮，苦瓜素，多糖，微量元素等，是用于糖尿病患者的保健食品。益康胶囊中可能非法添加格列本脲（别名：优降糖，达安疗，达安宁，乙磺己脲，优格鲁康，氯磺环己脲;外文名Glibenclamide）。格列本脲是第二代磺脲类药，具有明显的降糖作用，但是其不良反应也比较多，因此很多患者不适合服用。如果在不知情的情况下服用格列本脲就更加危险了，长期大量的服用，可导致患者低血糖和肾病，甚至死亡。益康胶囊是降糖类的食品，标识不含化药成分，如果非法添加，而患者在不知情的情况下长期服用，会产生严重的后果，因此，我们建立HPLC法测益康胶囊中非法添加格列本脲的含量[1]，使益康胶囊质量可控，确保人民使用安全有效。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器 Agilent 1260 高效液相色谱仪， Sartorlus-BP211D型电子天平，JCX—400G超声清洗器， UV-2450日本岛津紫外分光光度计
1.1.2 试药 ①对照品：格列本脲对照品[中国药品生物制品检定所，批号：100135-200404（供含量测定用）103 ℃干燥3 h后使用，约50 mg]。②药品：某厂家生产的益康胶囊（批号为：20130916，20130920，20130924）;③试剂：甲醇：色谱纯（美国），超纯水（自制），其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
2.1.1 溶液的制备 供试品溶液 取本品2粒，倾出内容物，称取约0.8 g（相当2粒重量），精密称定，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，残渣加甲醇同上，再重复提取2次，合并滤液，蒸干，残渣加甲醇适量溶解，转移至50 mL容量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。对照品溶液 取格列本脲对照品10 mg，精密称定，置100 mL容量瓶，加甲醇适量溶解，稀释至刻度，摇匀，制成浓度为每1 mL含0.1 mg的对照品溶液。阴性对照品溶液 取处方中药材的1/10量，按法制成片，再按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。
2.1.2 色谱条件的确定 色谱柱：①ODS HYPERSIL C18 200 mm ×4.6 mm 5 μm。②Shim-pack VP-ODS C18 150 mm ×4.6 mm 5 μm。③Alltima ODS C18 150 mm ×4.6 mm 5 μm;流动相：A：乙腈 B：0.02 mol/L乙酸铵-0.1%乙酸：甲酸：乙腈（60∶20∶20）;柱温：25 ℃;流速：0.8 mL/min ;检测波长：230 nm;理论板数以格列本脲峰计算应不低于 2000。波长：根据光谱扫描结果及参考有关格列本脲研究资料[2-3]，选用230 nm作为该试验格列本脲含量测定的检测波长。流动相：采用A：乙腈 B：0.02 mol/L乙酸铵-0.1%乙酸：甲酸：乙腈（60∶20∶20）为流动相，经试验，分离效果好，保留时间适度，故确定其为本法的流动相。取格列本脲对照品溶液，滤膜滤过，自动进样测定。结果无干扰，色谱条件符合要求。
2.2 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液1、3、5、10、15、30、50 μL注入色谱仪中，记录峰面积，见表1。
计算得回归方程：Y = 390.100 6814 X-13.531 980 3 r = 0.999 97。结果表明格列本脲在1.0～50 μg范围内呈线性。
2.3 精密度试验
取格列本脲对照品（批号：100135-200404），按含量测定方法制得供试品溶液，重复进样6次，记录峰面积[4]，实验结果见表2。
试验结果：RSD = 0.139 6%。表明该方法所用仪器精密度良好。
2.4 稳定性试验
取益康胶囊样品（批号：20130916），按含量测定方法制得供试品溶液，分别于0、3、6、12、24 h间隔进样测定，记录峰面积，以峰面积为指标，考察其稳定性[5]， 结果见表3。
试验结果：RSD = 0.190 8%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.5 重复性试验
取同一批样品（批号：20130916），依法独立含量测定6次[6] ，试验结果，见表4。
试验结果：RSD = 1.914%，表明该法重现性良好。
2.6 回收率测定试验
采用加样回收测定法[7-8]，取本品已知含量的样品（批号：20130916、格列本脲含量为1.41 mg/粒、平均粒重为0.401 2 g）适量，分别取6份（每份约0.4g），精密称定，每份各精密加入格列本脲对照品溶液14.1 mL，混匀，按含量测定法制备供试品溶液，并依法测定含量，结果见表5。
回收率%=■×100%
结果表明：该法平均回收率为98.34%，RSD为0.798 2%，表明本法准确度较好，方法可行。
2.7 样品含量测定
取益康胶囊样品（20130916，20130920，20130924），按制备供试品溶液及对照品溶液的方法制备，分别各取10 μL，注入色谱仪，依法测得，按外标法计算含量（n=3），结果见表6。
3 讨论
3.1 测定波长的选择
根据光谱扫描结果及参考有关格列本脲研究资料，试验表明选用230 nm作为该试验格列本脲含量测定的检测波长，测定结果适宜。
3.2 线性关系考察试验
格列本脲在1.0～50 μg范围内与峰面积呈线性关系，表明该法可行。
3.3 精密度试验
RSD值为0.139 6%，表明实验仪器精密度良好。
3.4 稳定性试验
本品甲醇溶液在常温24 h内基本稳定。此外，样品甲醇溶液在实验过程中放置24 h内含量基本未发生变化。
3.5 重现性试验
RSD值为1.914%，表明该试验方法重现性好。
3.6 回收率试验
平均回收率为98.34%，RSD为0.798 2%，表明该试验方法准确、可靠。
4 结语
通过实验探究发现运用高效液相色谱法测定益康胶囊中非法添加格列本脲的含量，该方法结果准确，方法简便，重现性及回收率均理想，对于制定该药的质量控制标准具有重要的参考价值。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.《中国药典》2010年版二部[M].北京.中国医药科技出版社，2010.
[2] 刘亚丽，段木盛，彭方.降糖中成药中格列苯脲的检测[J].中国药师，2005，8（7）：613.
[3] 张翠英，李振国，徐金玲.中药制剂及保健品中违禁添加7种降糖药物的LC-MS/MS定性检测[J].中国药学杂志，2008， 43（9）：707.
[4] 薛恒跃，王玉兰，于黎明，等.中药制剂中添加化学药品苯巴比妥的检测方法研究[J].时珍国医国药，2006，17（2）：216.
[5] 张平，黄赵刚，程刚，等.降糖宁中掺有西药降糖成分的检测[J].安徽医药，2006，10（3）：184.
[6] FDA. Guidance for Industry：Analytical procedures and methods Validation，chemistry，manufacturing，and controls documen tation（Draft）[S].2000.
[7] ICH Q2A：Test on Validation of Analytical Procedures[S].2007.
[8] ICH Q2B：Validation of Analytical Procedures：Methodology[S].2007.
（收稿日期：2016-07-06）
