定氮法测定鹿心中的蛋白质含量

DOI：10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.30.110

[摘要] 目的 采用氮测定法测定鹿心的蛋白质含量。方法 采用《中国药典》2015年版四部通则0704氮测定法中第一法（常量法）或第三法（定氮仪法）测定。结果 《中国药典》2015年版四部通则0704氮测定法中第三法（定氮仪法）测定消解，与第一法含量无差别。结论 鉴于各大药厂存在无消解仪、自动蒸馏仪及滴定仪的现象，故仍采用第一法进行测定。

[关键词] 鹿心；定氮；消解；蒸馏

[中图分类号] R9 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2017）10（c）-0110-03

鹿心具有调节人体新陈代谢、促进改善各种生理机能、养心气、安心脏、止汗化痰、抑制兴奋、活血通窍、化瘀止痛、对心脏病、心肌缺血、心绞痛，心动过速、心动过缓、脑动脉硬化，有较好效果。同时鹿心具有增强心肌收缩力、减低心肌耗氧量，对失眠盗汗，内脏积水引起心跳、心慌等症具有显著效果。同时作为多家药企生产的心脑康胶囊的主要原料。

1 仪器与方法

1.1 仪器及试剂

1.1.1 仪器 BSA 224S电热套；凯氏烧瓶（500 mL）；冷凝管；锥形瓶（500 mL）；滴定管（25 mL）；量筒（50 mL，100 mL）；NKD6280电位法凯氏定氮仪

1.1.2试剂 硫酸钾（分析纯）、硫酸铜（分析纯）、硫酸（分析纯）、硫酸铵（分析纯）、磷酸二氢铵（分析纯）、氢氧化钠、锌粒

1.2 消解条件考察

1.2.1 氮测定法 《中国药典》2015年版四部通则0704第一法）[1]。

1.2.2 取样量考察 以药材中蛋白质为考察对象进行含量测定。分别取本品粉末0.10、0.25、0.50、1.00 g，精密称定，照氮测定法[2]《中国药典》（2015年版四部）通则0704第一法）测定，根据硫酸滴定液（0.05 mol/L）消耗量，确定取样量。见表2。

根据上述滴定液消耗数量，控制滴定体积25 mL以下，确定取样量0.25 g。

1.3 样品中含量测定

分别精密称取11个批次梅花鹿、马鹿样品，按含量测定的方法进行测定。结果见表2。

1.3.1 氮测定法 《中国药典》（2015年版四部）通则0704第三法。

1.3.2 取样量考察 以药材中蛋白质为考察对象进行含量测定。分别取本品粉末0.1、0.2、0.3、0.5 g（含氮量9.98%），精密称定，照氮测定法（《中国药典》（2015年版四部）通则0704第三法测定，根据硫酸滴定液（0.05 mol/L）消耗量，确定取样量。见表3。

根据上述含量测定结果，控制滴定体积25 mL以下，确定取样量0.25 g。

1.3.3 样品中含量测定 分别精密称取11个批次公鹿的样品及7个批次母鹿样品，按含量测定的方法进行测定。结果见表4。

结果表明：氮测定法的第一法和第三法在测定结果比较中无差异。所以使用第一法和第三法都可以。

1.4 方法验证

1.4.1 线性关系考察 精密称取供试品粉末0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 g，照氮测定法（《中国药典》（2015年版四部）通则0704第一法测定，以取样量为横坐标，消耗滴定液体积值为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明供试品取样量在0.1～1.0 g范围内呈现良好线性关系。回归方程为Y=65.37X-0.099 3，r=0.999 9。见表5。

1.4.2 准确度 ①以磷酸二氢铵为基准物质的精密度考察。取已知含量的鹿心药材粉末0.25 g（含氮量9.98%以干品计算，水分5.4%），共取6份，精密加入磷酸二氢铵（含氮量12.17%）试剂适量，平行6份，按以上“供试品溶液的制备”项制备并测定，分别计算回收率，结果表明平均回收率为95.2%，RSD为0.56%。见表6。

②以硫酸铵为基准物质的精密度考察。取已知含量的鹿心药材粉末0.25 g（含氮量9.98%以干品计算，水分5.4%），共取6份，精密加入硫酸铵（含氮量21.21%）试剂适量，平行6份，按以上“供试品溶液的制备”项制备并测定，分别计算回收率，结果表明平均回收率为95.50%，RSD为0.01%。见表7。

结论表明：用磷酸二氢铵和硫酸铵两种基准物考察回收率无差异，回收率在95.00%～105.00%之间，方法可行。

1.4.3 精密度 ①重现性试验。取同一批号的样品6份（含氮量9.98%），分别精密称重，照氮测定法《中国药典》（2015年版四部）通则0704第一法）测定，计算测定结果的RSD值为0.2%。结果证明此方法重现性良好。

②中间精密度。实验室3名人员各做一个样品（已知含氮量9.98%），用同一台天平、相同试剂试药、同一条件消解测定，测得蛋白质的含量分别为9.97%、9.96%、9.96%，计算其相对标准偏差RSD为0.1%。

1.4.4 专属性 取空白试剂，照氮测定法《中国药典》（2015年版四部）通则0704第一法测定，消耗滴定液体积值为0.20 mL。

1.4.5 耐用性 取同一批号的样品6份（已知含氮量9.98%），分别精密称重，照氮测定法《中国药典》（2015年版四部）通则0704第一法测定，采用不同厂家试剂、试药进行试验，计算测定结果，测定结果的RSD值为1.1%。结果证明此方法重现性良好。

1.4.6 稳定性试验 取同一批号的样品7份，分别精密称重（已知含氮量9.98%），照氮测定法《中国药典》（2015年版四部）通则0704第一法蒸馏后放置0、4、8、12、16、20、24 h测定，计算测定结果的RSD值为0.2%。结果证明此方法重现性良好。见表8。

1.5 样品中含量测定

分别精密称取11个批次梅花鹿、马鹿的样品，按含量测定的方法进行测定。结果见表9。

2 结论

根据公鹿11批样品的检测结果，平均值为10.29%，將含量限度为“本品按干燥品计算，含总氮（N）不得少于8.0%”。方法可行。

3 讨论

鹿心为吉林省的地道药材。目前心脑康胶囊、心脑康片、等中成药中鹿心为主药，具有良好的市场基础。该项目目的就是建立鹿心药材的质量标准，适用于医院、企业生产、科研和经营中对鹿心的鉴定和质量检验。定氮法能有效的控制其蛋白质的含量，方法简单易操作，方法依据为《中国药典》2015年版，方法可行。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2015年版一部[M].中国医药科技出版社，2015.

[2] 罗美兰，丁志军.凯氏定氮法测定土鳖虫多肽片的总氮量，中国药房[J].2013，24（25）：2365-2367.

（收稿日期：2017-07-24）