NPRL2与肝细胞癌大小相关性研究

[摘要]目的：NPRL2在肝细胞癌大小相关性。方法：收集本院手术切除的HCC组织标本56例，按肝癌大小分组：甲组≤2cm，乙组>2cm≤5cm，丙组>5cm，采用荧光定量PCR法检测NPRL2蛋白和mRNA的表达情况。结果：肝癌组织中NPRL2蛋白和NPRL2 mRNA的表达在丙组最高。结论：在肝癌中NPRL2 mRNA和蛋白水平较与肿瘤大小成正相关。

[关键词]肝癌；抑癌基因；NPRL2

[中图分类号]R596.2 [文献标识码]A [文章编号]1672-5018（2016）12-028-01

抑癌基因NPRL2（nitirogen permease regulator like 2）也称肿瘤抑制候选基因4（tumor suppressor candidate 4，TUSC4），广泛存在于人体各种组织中，定位于人染色体3p21.3区域，Kok等“认为在该区域内存在一个乃至多个与肿瘤发生密切相关的抑癌基因。Lerman等从人3号染色体短壁上克隆得到抑癌基因NPRL2（nitrogen permeaseregulator like 2），研究发现该基因的失活与多种肿瘤的发生发展关系密切，但其具体的抑癌机制尚不明确。研究发现，人类多种肿瘤组织（如肺癌、乳腺癌、鼻咽癌、卵巢癌和肾癌等）中的表达明显降低。但其与肝细胞肝癌的的关系研究甚少。本文研究探讨NPRL2在肝细胞肝癌中的表达情况与肿瘤大小关系，采用荧光定量PCR法检测NPRL2蛋白和mRNA的表达情况。

1资料与方法

1.1研究对象：收集本院手术切除的HCC组织标本56例（经病理学证实为原发性肝细胞性肝癌，所获标本均获得本院伦理委员会批准书及患者知情同意书）。所有患者术前均未接受过放射治疗和化学治疗。新鲜组织在手术后立即去掉坏死组织、血块，将收集的标本分2份，1份30min内以液氮保存，并放人-80%冰箱中保存，另1份放人4%多聚甲醛溶液固定。

主要试剂：免疫组化化学试剂盒购自上海生工生物有限公司，NPRL2鼠抗人单克隆抗体购自美国SantaCruz公司，超敏sP试剂盒、DAB均购自上海Genetech公司，Trizol总RNA抽提试剂盒购自上海生工生物公司，逆转录酶（MMLV-RT）购自美国Promega公司，ReM-time PCR专用svbergreen荧光染料购自美国Biorad公司。

1.2实验方法：

荧光定量PCR检测NPRL2 mRNA的表达：采用引物设计软件（Primer 5.0）进行引物序列设计：NPRL2上游引物：5-CAGGGGT]？ACAGACTFGGGT-3'，下游引物：5-TGTAACTGGGCTTGGTGAT-3，内参基因GAPDH上游引物：5-GAGACACCGCTCTFCTFG-3'，下游引物：5-TGACTGTCCGTFGAACTTG-3'。按Tfizol常規法抽提组织总RNA去除基因组DNA，RNA定量后逆转录；取才cDNA 1μl进行荧光定量PCR实验；分析实验数据，出示实验报告。

1.3标本分组情况

甲组≤2cm，12例；乙组>2cm≤5cm，28例；丙组>5cm，16例。

1.4统计学方法：用SPSS17.0统计软件分析，计量资料以均值±标准差表示，采用单因素方差分析检验组间差异的显著性。计数资料以阳性率表示，采用卡方检验。

2实验结果

肝癌组织中NPRL2蛋白的检测：

肝癌组织中NPRL2 mRNA的表达：各样本的扩增曲线呈线性关系，溶解曲线呈单峰。丙组，乙组和甲组NPRL2基因的表达水平分别是：1.732±0.253、4.043±0.362和5.123±0.182（P<0.5）。

3讨论

NPRL2生物间有高度保守性，小鼠的NPRL2蛋白有97%和人类相同。研究证实，NPRL2在许多正常组织中均有表达，如：肝脏、肾脏、肺和胰腺。而在许多肿瘤中表达明显降低，如肺癌、鼻咽癌、乳腺癌、卵巢癌和肾癌等。研究结果证实，该基因与DNA错配修饰、细胞周期信号转导以及细胞凋亡途径密切相关。这些研究提示，NPRL2基因能有效干扰多种肿瘤细胞的生长，其可能在肝癌的发生和发展中起重要作用。本研究结果显示，NPRL2蛋白的阳性信号主要定位于胞质和（或）胞核中。在肝癌中NPRL2 mRNA和蛋白水平与肿瘤表达成正相关。

综上所述，NPRL2在肝癌中表达情况与肿瘤大小成正相关，可以运用在我们临床工作中。