HPLC法测定三七伤药片、胶囊和颗粒中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量
[摘要] 目的 建立HPLC法测定三七伤药片、三七伤药胶囊、三七伤药颗粒中三七的含量测定方法。方法 色谱柱：Agilent HC C18（250×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈：水，采用梯度洗脱程序；检测波长：203 nm。结果 人参皂苷 Rg1在0.276～2.346 μg范围内，线性关系良好，r=0.999 9；平均回收率为99.01%（n=6），RSD=2.5%；人参皂苷 Rb1在0.243 2～2.067 2 μg范围内，线性关系良好，r=0.999 9；平均回收率为98.38%（n=6），RSD=1.5%。结论 该法简便，准确，重现性好，可作为评价三七伤药片、三七伤药胶囊、三七伤药颗粒的质控方法。
[关键词] 三七；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；含量测定；高效液相色谱
[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2017）05（a）-0077-05
[Abstract] Objective To establish the method of HPLC method in measuring the ginsenoside Rg1 and Rb1 in the sanqishangyao tablets and capsules and granules. Methods Chromatographic column Agilent HC C18（250×4.6 mm，5 μ）， mobile phase： acetonitrile， water， gradient elution program， determine wavelength： 203 mm. Results Ginsenoside Rg1 was between 0.276 and 2.346 μg， and the liner correlation was good， r=0.999 9，The average recovery was 99.01% （n=6）， RSD=2.5%. Ginseng saponin Rb1 in 0.243 2 ～ 2.067 2 μg， and the liner correlation was good，r=0.999 9，the average recycle rate 98.38%（n=6）， RSD=1.5%. Conclusion The method is simple and accurate， and the reproducibility is good， which can be used as the quality control method of evaluating the Sanqishangyao tablets and capsules and granules.
[Key words] Sanqi； Ginsenoside Rg1； Ginsenoside Rb1； Measurement of constant； High-pressure liquid chromatography
三七伤药片、三七伤药胶囊、三七伤药颗粒为骨科用药，只要功效为舒筋活血，散瘀止痛，用于跌打损伤，风湿瘀阻；急慢性扭挫伤，神经痛[1-2]。该系列品种均由三七、制草乌、雪上一枝蒿、冰片、骨碎补、红花、接骨木和赤芍八味药材组成的复方制剂，三七为君药，具有散瘀止血，消肿止痛之功效[3]。控制其质量十分必要，参照中国药典三七项下分析方法进行了含量测定研究[4]。实验结果表明由于制剂中干扰因素较多，三七皂苷R1无法检测，因此对人参皂苷Rg1、Rb1的含量进行了测定，具有合理性，且方法易于操作，阴性无干扰，结果准确，重现性良好，可作为评价三七伤药系列品种的质控标准。
1 仪器与试药
Agilent1100 series高效液相色谱仪；试剂均为色谱纯或分析纯；对照品人参皂苷Rg1（110754-200421）、Rb1（110734-200726），均购自中国药品生物制品检定所。三七伤药片为上海上联药业提供，批号：100301。
2 色谱条件
Agilent HC C18分析柱（250×4.6mm，5 μm），柱温40℃，流速0.8 mL/min，检测波长203 nm，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表1进行梯度洗脱。
3 试验方法
3.1 对照品溶液的制备
精密称取在105℃干燥12 h的人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的混合溶液，摇匀，即得。
3.2 供试品溶液的制备
取该品2 g，研细，精密称定，精密加入甲醇50 mL，称定重量，放置过夜，超声处理（功率350 W，频率50 kHz）40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，水浴蒸干，残渣加水15 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，20 mL/次，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得，见图1、图2、图3。
3.3 标准曲线制备
精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1ml含人參皂苷Rg1对照品0.138 mg、人参皂苷Rb1对照品0.1212 mg的混合溶液，分别精密吸取2、5、8、11、14、17 μL注入液相色谱仪，依法测定，以对照品溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。见表2、表3。
结果表明，人参皂苷 Rg1在0.276～2.346 μg、人参皂苷 Re在0.243 2～2.067 2 μg范围内，呈良好线性关系，符合外标法定量测定的要求。
3.4 精密度试验
精密吸取供试品溶液5 μL，注入液相色谱仪，重复进样6次，测定其色谱峰面积值。见表4、表5。
结果表明，所用仪器具良好的精密性。
3.5 稳定性试验
取供试品溶液5 μL，按正文色谱条件，于不同的时间进行测定，结果见表6、表7。
结果表明6 h内供试品溶液中人参皂苷Rg1 和人参皂苷Rb1的含量基本稳定。
3.6 重复性试验
取同一批号样品（广西玉林制药有限公司310052），依正文方法独立操作，测定6次，结果见表8、表9。
结果表明本法具有良好的重复性。
3.7 回收率试验
取已知含量的供试品：人参皂苷 Rg13.789 4 mg/g、人参皂苷Rb12.857 8 mg/g 各6份，每份约1.0 g，精密称定，分别精密加入配成含对照品溶液人参皂苷 Rg1 （0.044 62 mg/mL）、人参皂苷Rb1（0.0350 64 mg/mL）的对照品溶液50 mL，依含量测定项下方法测定。计算回收率，结果见表10、表11。
如上表所示，人参皂苷 Rg1的平均回收率为99.01%，RSD=2.52%；人参皂苷Rb1的平均回收率为98.38%，RSD=1.51%；证明方法具有一定的准确性，方法可行。
3.8 检出限与定量限。
检出限为信噪比的3倍高，精密量取人参皂苷Rg1（138.0 μg/mL）和人参皂苷Rb1（121.6 μg/mL）对照品溶液，照正文方法检测，进样量为0.5 μL。检出限分别为0.069 μg和0.061 μg。
定量限为信噪比的10倍高，精密量取人参皂苷Rg1（138.0 μg/mL）和人参皂苷Rb1（121.6 μg/mL）对照品溶液依照正文方法检测，进样量为1.5 μL，定量限分别为0.207 μg和0.183 μg。连续测定6次，平均值分别为84.71（RSD=1.27%）和52.67（RSD=2.32%）。符合定量分析的要求。
3.9 样品测定
依法测定三七伤药片、胶囊和颗粒样品。见表12、表13、表14。
4 讨论
不同厂家色谱柱耐用性考察：取同一供试品溶液分别采用Agilent HC C18（4.6×250 mm，5 μm）的色谱柱、Diamonsil C18（250×4.6mm，5 μm）的色谱柱、Agilent Extent C18（4.6×250 mm，5 μm）的色谱柱按正文拟订的方法测定。
实验结果显示，所选用的三种色谱柱均达到方法系统适用性的要求。但是Agilent HC C18（250×4.6 mm，5 μ）柱和Agilent Extent C18 （250×4.6 mm，5 μ）柱可在60 min内将人参皂苷Rg1、Rb1混合对照品溶液完全分离，Diamansil C18（4.6×250 mm，5 μm）柱超过100 min，说明其对色谱柱有一定的选择性。故本法采用Agilent HC C18（250×4.6 mm，5 μ）柱。
[参考文献]
[1] 魏莉本.三七伤药片的质量分析与质量标准探讨[J].中国药师，2011，14（7）：1060-1061.
[2] 贾春芝， 高波.玉林三七伤药胶囊活血止痛作用的临床观察[J].山西中医学院学报，2003， 4（4）： 27.
[3] 李家實.中药鉴定学[M].上海：上海科学技术出版社，1998：1321.
[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部[S]. 北京：中国医药科技出版社，2010：11.
（收稿日期：2017-02-11）
