儿咳合剂（I）的质量标准研究

DOI：10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.22.127

[摘要] 目的 提升儿咳合剂（I）的质量标准。方法 改进儿咳合剂（I）中甘草的薄层鉴别方法，采用平皿法和培养基稀释法对儿咳合剂（I）中微生物限量进行检查，采用凯氏定氮法测定儿咳合剂（I）中氯化铵的含量。结果 二氯甲烷可以代替毒性较大的三氯甲烷作为甘草的薄层鉴别展开剂，且在日光下已能鉴别，不一定需要再在紫外灯（365 nm）下检视。培养基稀释法可消除儿咳合剂（I）对枯草芽孢杆菌的抑菌作用。氯化铵的加样回收率为99.54%，RSD为1.935%（n=6）。结论 该方法操作简便，准确性高，可为儿咳合剂（I）质量控制提供参考。

[关键词] 儿咳合剂（I）；薄层色谱法；微生物限度；凯氏定氮法

[中图分类号] R286 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2016）08（a）-0127-04

儿咳合剂是由甘草流浸膏、桔梗流浸膏、氯化铵等按照一定比例制成的制剂，具有止咳、祛痰的功效，适用于小儿支气管炎等症。目前，该制剂的质量标准较为简单，为了提升其质量标准，规范产品质量，我们在前期摸索了儿咳合剂（I）薄层鉴别方法 [1]的基础上，又做了补充研究。后期研究发现，薄层鉴别试验所用的三氯甲烷对操作人员的毒性较大，且属于易制毒化学品，因此，拟用性质与其类似而毒性相对较小的二氯甲烷代替三氯甲烷。另外，我们验证了儿咳合剂（I）的微生物限度检查，并建立了儿咳合剂（I）中氯化铵的含量测定方法，现报告如下。

1 仪器与材料

电光分析天平TG328A、医用净化工作台YS-1300-V（苏州安泰空气技术有限公司）、隔水式恒温培养箱GSP-9080MBE （上海博讯实业有限公司医疗设备厂）、霉菌培养箱MJX-160B-Z（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）、电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）、UV紫外荧光仪。

儿咳合剂（I）（常州市第三人民医院提供，批号：131119、140312、140701），甘草对照药材（购自中国药品生物制品检定研究院，批号：120904-201318），硅胶G板（青岛谱科分离材料有限公司）。氯化铵（河北华晨药业有限公司，批号：2014.03.19）。0.05 mol/L硫酸滴定液（江苏省常州药品检验所提供）。所用试剂均为分析纯。

菌株：大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B）44 102]、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B）26 003]、枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC（B）63 501]、白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC（F）98 001]（中国医学细菌保藏中心提供，批号依次为：3a19-2、5a18、2a14、2a7）、黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC（F）98 003]（中国药品生物制品检定所提供，批号201307）。

培养基：营养琼脂培养、玫瑰红钠琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、MUG培养基 、改良马丁培养基、营养肉汤培养基（北京三药科技开发公司，批号依次为：130307、1302182 、1401152、130106 、140805、140422 、140318）。培养基灵敏度实验符合2010年版中国药典规定。

2 方法与结果

2.1 甘草的定性鉴别

取本品20 mL，按照前期摸索的儿咳合剂（I）薄层鉴别方法进行对照药材溶液、供试品溶液和缺甘草阴性对照溶液的制备，再吸取上述三种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，再置紫外光灯（365 nm）下检视[2]。结果见图1。

日光下观察 紫外灯（365 nm）下观察

图1 儿咳合剂（Ⅰ）中甘草的鉴别薄层色谱图

①甘草对照药材；②儿咳合剂（Ⅰ）（160128）；③儿咳合剂（Ⅰ）（160205）；④儿咳合剂（Ⅰ）（160217）；⑤缺甘草阴性

由图1可见，二氯甲烷代替毒性较大的三氯甲烷作为甘草的薄层鉴别展开剂后，供试品薄层色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，阴性样品对检出无干扰，且在日光下已经能鉴别，不一定需要再在紫外灯（365 nm）下检视。

2.2 微生物限度检查

取本品10 mL，参考《中国药典》2010年版一部附录XIII C微生物限度检查法和文献，对儿咳合剂（I）的细菌、霉菌和酵母菌回收率和大肠埃希菌的检查方法进行了验证[3]，结果如下。

由表1可见，三次平行实验中，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠球菌、黑曲霉回收率均不低于70%，但枯草芽孢杆菌回收率均低于70%，说明平皿法（常规法）适用于该供试品的霉菌及酵母菌计数，但不适用于细菌计数，其细菌计数改用培养基稀释法（0.2 mL/皿）进行验证，结果见表2。

由表2可见，三次平行实验中，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌回收率均不低于70%，说明培养基稀释法（0.2 mL/皿）适用于该供试品的细菌计数。

由表3可见，试验组可检出大肠埃希菌，而供试品对照组未检出大肠埃希菌，说明供试品不影响大肠埃希菌的生长，常规法可用于儿咳合剂（I）中大肠埃希菌的检查。

2.3 氯化铵的含量测定

2.3.1 测定方法 精密量取本品10 mL，置凯氏烧瓶中，加水250 mL，摇匀，加碎毛细管数根，再加20%氢氧化钠溶液10 mL，玻璃棒一根，立即用氮气球将烧瓶与冷凝管连接[2]。冷凝管的尖端浸入4%硼酸溶液50 mL的液面下，加热蒸馏，至2/3的溶液馏出时（接受瓶中约240 mL液体），将冷凝管提出接近液面，让蒸汽冲洗1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏，馏出液加甲基红-溴甲粉绿混合指示液10滴，用硫酸滴定液（0.05 mol/L）滴定，滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，随行做空白试验，并将滴定的结果用空白试验校正[4]。每1 mL硫酸滴定液（0.05 mol/L）相当于5.349 mg氯化铵（NH4Cl）。

2.3.2 空白试验 按照儿咳合剂（I）处方制得缺氯化铵的阴性制剂，精密量取阴性制剂10 mL，按照2.3.1 方法进行空白试验校正。

2.3.3 线性关系考察 精密量取缺氯化铵阴性制剂10 mL，再加入精密称定的氯化铵，按照2.3.1方法测定，记录滴定体积（mL）。以滴定体积（X，mL）为横坐标，氯化铵的称样量（Y，mg）为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表4。

2.3.4 重复性试验 精密量取同一批号的儿咳合剂（I）6份，按照2.3.1方法测定氯化铵含量，平均值为94.59 mg，RSD为0.887%（n=6）。

2.3.5 加样回收率试验 精密量取同一批号的儿咳合剂（I）（批号：140312）5 mL，再加入精密称定的氯化铵50 mg，按照2.3.1方法测定氯化铵含量，计算加样回收率，得氯化铵的加样回收率为99.54%，RSD为1.935%（n=6）。结果见表5。

2.3.6 样品的测定 取三批儿咳合剂（I），按照2.3.1方法测定氯化铵含量。结果见表6。

3 讨论

儿咳合剂（I）由氯化铵、甘草流浸膏、桔梗流浸膏、橙皮糖浆组成，我们分别摸索了氯化铵、甘草流浸膏，桔梗流浸膏和橙皮糖浆的鉴别方法。实验结果表明，按处方量制备的缺氯化铵的阴性对照溶液中氯离子和铵离子反应均呈阳性，说明阴性对检出存在一定的干扰，因此，不可作为儿咳合剂（I）的鉴别方法。桔梗的鉴别反应研究实验效果不理想，考虑到儿咳合剂（I）原料中甘草流浸膏和桔梗流浸膏比例为5：1，100 mL儿咳合剂（I）约含有3 mL桔梗流浸膏，且甘草和桔梗流浸膏中均含有三萜和皂苷类成分，阴性干扰很大，因此，桔梗的鉴别不可作为儿咳合剂（I）的鉴别方法。由于橙皮糖浆是作为矫味剂使用的，100 mL儿咳合剂（I）中约含有2.5 mL橙皮酊，且甘草流浸膏中也有较多的黄酮类成分，阴性干扰很大，因此，橙皮的鉴别也不可作为儿咳合剂（I）鉴别方法。而甘草的鉴别反应效果较好，无论展开剂是三氯甲烷还是二氯甲烷，供试品薄层色谱在与对照药材色谱相应的位置上，都显相同颜色的主斑点，阴性样品对检出无干扰，在日光下已经能鉴别，不一定需要再在紫外灯（365 nm）下检视，且不同点样量、不同温湿度、不同厂家薄层板条件下薄层色谱的重现性和耐用性均较好，因此，将其纳入儿咳合剂（I）鉴别方法。

微生物限度检查是保证药品质量的重要指标，儿咳合剂（I）的原质量标准采用常规的平皿法进行细菌、霉菌及酵母菌的计数，采用常规法进行控制菌大肠埃希菌的检查，但没有对该方法进行过方法学验证，而药品可因原料或辅料、工艺、剂型等因素表现出一定的抑菌活性，常规法不一定都适用，因此，需要进行方法学验证[5]。研究过程中发现，儿咳合剂（I）对枯草芽孢杆菌具有一定的抑制作用，推测可能甘草或桔梗流浸膏对其有抑制作用，抑制作用的强弱有待进一步研究。

氯化铵具有刺激胃粘膜，反射性地兴奋迷走神经，引起恶心，使支气管腺分泌增加，黏痰变稀，易于咳出的作用[6]，是儿咳合剂（I）祛痰作用的主要成分。我们采用凯氏定氮法对儿咳合剂（I）中氯化铵的含量进行测定。研究过程中发现，按照儿咳合剂（I）处方制得缺氯化铵的阴性制剂经测定后，也会消耗少量硫酸滴定液，考虑到这可能是因为缺氯化铵的阴性制剂中含有甘草流浸膏，而甘草流浸膏制备过程中为了防止甘草酸析出而加入了浓氨试液调节pH值在7.5～8.5 [7]。因此，我们制备缺氯化铵的阴性制剂进行空白试液，每次测定随行做空白试验，并将滴定的结果用空白试验校正。另外，在凯氏烧瓶中加入数粒玻璃珠后溶液仍然会冲出进入接收瓶中导致实验失败，但在凯氏烧瓶中加入碎毛细管和一根玻璃棒可避免此现象，提高实验成功率。经线性、重复性、加样回收率考察，建立的氯化铵的含量测定方法专属性强，重现性好，可用于儿咳合剂（I）的质量控制。

[参考文献]

[1] 范正达， 陈海鹰. 儿咳合剂（I）的薄层色谱鉴别[J]. 海峡药学， 2014， 26（11）：81-82.

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[S]. 2010年版. 北京：中国医药科技出版社，2010：476.

[3] 范震洪. 蜂胶浓缩液微生物限量检查方法的建立[J]. 药品评价， 2011， 8（24）：24-27.

[4] 区洁雯， 吕冠欣， 孙俊军，等. 停咳糖浆中盐酸麻黄碱与氯化铵的含量测定[J]. 中国药师， 2013， 16（6）：845-847.

[5] 刘萍.7厂家盐酸环丙沙星滴眼剂微生物方法验证对比[J].中外医疗， 2011（23）：122.

[6] 朱斌. 探讨镇咳与祛痰的用药区别[J]. 医药前沿，2013（9）：374.

[7] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[S]. 2010年版. 北京：中国医药科技出版社，2010：376.

（收稿日期：2016-05-07）