正交试验优选红杏贝止咳口服液的提取工艺

[摘要] 目的 优选红杏贝止咳口服液的提取工艺。方法 通过分光光度法测定总黄酮的含量，采用L9（34）正交试验，以出膏率和总黄酮得率考察水提工艺条件。结果 分光光度法测定总黄酮的含量得回归曲线：A=5.378C+0.1055，r=0.999 4。蘆丁在5.8～14.5 μg/mL范围内，吸收度和浓度的线性关系比较好。以出膏率和总黄酮得率考察提取工艺条件为：药材用8 倍量水提取3 次，3 h/次。结论 上述实验结果可作为红杏贝止咳口服液的提取工艺。

[关键词] 正交试验；总黄酮；提取工艺

[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2017）12（a）-0140-02

红杏贝止咳口服液由满山红、苦杏仁、浙贝母三味药组成，具有镇咳、化痰、平喘的功效。临床用于急慢性支气管炎、咽喉部疾病引起的咳嗽等症。满山红即杜鹃花，该品为杜黯花科植物兴安杜的干燥叶。具有镇咳、平喘祛痰、抗炎抑菌、降压、利尿、镇痛等作用；归肺、脾经。苦杏仁，该品为东北杏、山杏、西伯利亚杏等蓄薇科的植物种子。功能主治有降气止咳平喘，润肠通便。用于咳嗽气喘，胸满痰多，血虚津枯，肠燥便秘。浙贝母，该品为百合科植物浙贝母的干燥鱗茎。治风热咳嗽，肺痈喉痹，瘰疬，疮疡肿毒。该实验采用单因素水平试验， 采用正交试验法，以出膏率和总黄酮得率为指标，考察水提取量、提取次数和提取时间对该品的影响，含量测定采用分光光度法以芦丁为对照品测定总黄酮含量，优选最佳的提取工艺条件[1-3]。

1 仪器与试药

1.1 仪器

U-3010分光光度计；XA205DU电子天平，752 型紫外光栅分光光度计；ZK82B 真空干燥箱。

1.2 试药

芦丁对照品购买来源是中国药品生物制品检定所，（批号：0080-9905），实验中其余的试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 样品制备

选用L9（34）正交表，按表1内容进行实验。将自制样品在40℃烘干，粉碎成粗粉，精密称取各样品约1 g共9份。趁热将残渣过滤出来，用60%乙醇洗涤后，装入50 mL的容量瓶中定容至刻度，均匀摇晃。用移液管量取2 mL样品溶液，放入10 mL的容量瓶里，再加入60%乙醇溶液到容量瓶刻度，最后得到9份样品溶液。

2.2 总黄酮的测定

2.2.1 标准曲线的制备 将减压干燥器中放置五氧化二磷后，把芦丁对照品置于减压干燥中干燥到恒重，配制终浓度为58 μg/mL的芦丁对照品溶液。得到回归曲线是：A=5.378C+0.1055，r=0.999 4，吸收度和浓度的线性关系比较好。

2.2.2 样品测定 样品溶液照“标准曲线制备”项下的方法，用移液管吸取样品溶液1.0 mL，分别放入10 mL的容量瓶里，按照2.2.1方法中从“加入0.1 mol/L三氯化铝溶液”起，置吸收度测定选择的波长为340 nm，测定，并按回归方程计算样品溶液中总黄酮含量。

2.3 固形物的测定

将药材按照上述设计的正交实验表煎煮，药渣过滤后，将药液浓缩到较粘稠后，取一定重量放到已经干燥至恒重的蒸发皿中，放置在水浴上将其蒸干，快速称定重量，直到2次称定的重量差相差不超过0.000 4 g即为恒重，计算固形物重量。记录结果。

3 实验结果

各样品总黄酮含量级出膏率见表2。

实验结果的计算和分析见表3。从实验结果中能够看出来每个因素对实验提取结果的影响程度依次为C（提取次数）>A（加水量）>B（提取时间），C因素具有显著性差异，所以得到最佳的组合水平是A1B3C3。

4 讨论

①红杏贝止咳口服液由满山红、苦杏仁、浙贝母三味药组成。其中满山红中含有的杜鹃素对镇咳、平喘祛痰有明显作用，愈创木奥类和梫木毒素的抗炎抑菌和镇痛作用明显；苦杏仁中含有苦杏仁苷在体内能被肠道微生物酶或苦杏仁本身所含甜杏仁的苦杏仁酶水解，产生微量的氢氰酸与苯甲醛，对呼吸中枢有抑制作用，达到镇咳、平喘作用。浙贝母含有贝母碱（贝母素甲）、去氢贝母碱（贝母素乙）、浙贝宁等成分，其中贝母碱与去氢贝母碱有镇咳作用，贝母生物碱具有阿托品样作用，低浓度可使气管平滑肌松弛， 高浓度可使气管平滑肌轻微收缩起到解痉挛的作用，贝母碱与去氢贝母碱有镇静及镇痛作用[4]。满山红、苦杏仁、浙贝母三味药物联合相互影响能够起到协同增效的作用。

②绝大多数植物体内都含有黄酮类化合物，它在植物的生长、发育、开花、结果以及抗菌防病等方面起着重要的作用。满山红中的杜鹃素等均属于黄酮类物质，由于含有多个黄酮类成分，所以测定总黄酮的含量。该实验采用分光光度法以芦丁为对照品测定总黄酮含量。波长的选择时，对芦丁对照品溶液进行200～800 nm波长扫描发现，芦丁对照品在340 nm和510 nm两处分别有吸收峰出现，综合比较峰形，选择340 nm进行测定。测定方法选取好后，先进行了标准曲线的实验，实验结果显示芦丁在5.8～14.5 μg/mL范围内，吸收度和浓度的线性关系比较好，证明次试验方法可行，接着按照次试验方法进行了自制9个样品的总黄酮含量测定，通过含量测定结果，选择最佳的提取方法。

③固形物测定时，放入烘箱内干燥4 h称重时若没有恒重，需要继续烘干直置恒重，不限定于时间必须为4 h。

④实验通过L9（34）正交试验的结果，以出膏率和总黄酮含量为考察指标，研究水提取的时间、次数和加水量的最佳工艺。结果说明，最佳的实验方案是A1B3C3，即加入8 倍量的水，每次提取提2 h，一共提取3 次。为了验证所选的这个最佳方案的可行性，又进行了3次验证性实验，验证试验结果显示此方法稳定，相对偏差较小，证明此测定方法误差较小，提取工艺可行。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：化学工业出版社，2015：361.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：化学工业出版社，2015：201.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：化学工业出版社，2015：292.

[4] 罗永会，张翠香，徐春萍，等.正交试验优选大理野生橄榄总多酚的提取工艺[J].食品科技，2013，5（11）：112.

（收稿日期：2017-09-02）