食品中金黄色葡萄球菌的检测分析

[摘要] 目的 对食品中金黄色葡萄菌检测方法中的纸片法进行分析。方法 2013年6月—2014年6月对三类食品分别定量进行纸片法及B-P平板法的金黄色葡萄球菌检测，将各数据进行记录对比分析。结果 纸片法的检测符合良好，纸片检测与B-P平板法检测结果差异无统计学意义（P>0.05），线性相关密切。纸片法检测与B-P平板法检测的结果一致性高。结论 纸片法检测具有易操作，省时省力的优点，可以在针对金黄葡萄球菌的食品快速检测中加以推广应用。

[关键词] 食品检测；金黄色葡萄球菌；纸片法；B-P平板法

[中图分类号] R155.5 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2015）01（c）-0020-02

[Abstract] Objective The paper detecting method of aureus in food analysis of. Methods In 2013 June to 2014 June detection of Staphylococcus aureus in three types of foods were quantitatively. Disk diffusion method and B-P plate method， each data record comparison analysis. Results The detection of paper method accord well， no significant difference between the detection results of slip detection and B-P plate method （P>0.05）， linear correlation closely. Test paper method detection and B-P plate method results consistency. Conclusion Disc assay is easy to operate， time-saving advantages， can be extended and applied in the rapid detection of Staphylococcus aureus in food for.

[Key words] Food detection；Staphylococcus aureus；Slip method；B-P plate method

金黄色葡萄球菌是人类生活中最常见的致病菌，其广泛存在于自然界中，尤其是食品。金黄色葡萄球菌引发毒素型食物中毒的三大主因之一[1]。食品中超出一定数量的金黄色葡萄球菌就会导致食用者出现呕吐、腹泻、发烧，甚至死亡的中毒事件[2]。随着食品安全的逐步升级，对食品中金黄色葡萄球菌的检测成为食品检测中的重要内容。近些年科学技术的不断发展，人们对金黄色葡萄球菌的检测方法不断更新，市面上涌现出多种方法进行金黄色葡萄球菌的检测[3]。2013年6月—2014年6月采用对比方式对纸片检测法进行分析。

1 材料与方法

1.1 实验材料和设备

实验材料选取该地市场和超市的肉制品、速冻食品及凉菜三大类食品，各20。平板计数琼脂、B-P培养基、增菌剂（卵黄亚碲酸钾）、金黄色葡萄球菌快速检验测试片、磷酸缓冲稀释液、鲜兔血浆、抗凝剂（EDTA）及革兰氏染液等。主要设备有：恒温培养箱及水浴箱、振荡器、显微镜、移液枪、天平、无菌工作台、无菌均质杯等。

1.2 实验方法

1.2.1 制备样品 样品的制备依GB4789.10-2010标准中关于B-P平板计数法操作：无菌状态下取25 g样品放入装有225 mL磷酸缓冲稀释液的无菌均质杯中，设定转速为8000 r/min均质120 s，制成固样质量比为1：10的样品匀液，用平板计数进行测定，每稀释度操作2次重复测定。

1.2.2 金黄色葡萄球菌的纸片法 用移液枪将样品匀液1 mL垂滴于掀开上层膜的测试片正中，缓慢盖下上层膜，令接触面里无气泡，并专用压板轻压压板液，使样液均匀覆盖于圆形培养面，静置试片至少60 s，待胶体凝固于34～36℃或36～38℃条件下培养22～26 h。如均为暗紫红色菌落或无菌落，则测试完成；若有黑或蓝绿色可疑菌落，则在室温为34～36℃或36～38℃条件下，继续加入确认反应片培养1～3 h并观察记录结果。金黄色葡萄球菌计为全部暗紫红色菌落；施用确认片后，计数全部有或没有菌落的粉红色晕圈，无粉红晕圈的菌落经判定为革兰氏杆菌或其他，不计数。

1.2.3 金黄色葡萄球菌的B-P平板检测法 可参见中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SNT0172-2010有关进出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法的相关流程[4]。

1.3 统计方法

采用SPSS 13.0统计软件对实验结果进行相关及差异性分析，比较这两种方法的异同。

2 实验结果及分析

2.1 金黄色葡萄球菌检出率

肉制品类检出率分别为70%、40%；速冻食品中40%、10%；凉菜类均为20%。不同类别产品中金黄色葡萄球菌的检出率与加工流程、流通渠道、包装和产品特性等有不同程度的关系。肉类金黄色葡萄球菌检出率高可能与其加工流程不进行灭菌处理等操作不卫生有关。此外，肉类销售暴露在外界环境中时间较长，易受金黄色葡萄球菌的污染。速冻食品其相对湿润的环境适宜金黄色葡萄球菌的繁殖，运输及销售环节也容易造成再污染。

两种方法的符合率：肉制品类为100%、速冻食品中为80%、70%、凉菜类70%、50%，其原因可能是食品基质差异性造成。

2.2 统计分析

使用SPSS 13.0统计软件对纸片法与B-P平板计数法的实验结果进行样品t检验F检验对比，结果见表1。

全部样品显著概率P>0.05，检测无差异。肉类相关系数近0.89，速冻食品及凉菜类相关系数均在0.95以上，总相关系数达0.905，说明两种检测法线性密切相关。由回归方程的假设检验可知，F分布的显著概率均为零，说明两变量间的具有极为显著的线性相关。

2.3 两种检测的其他指标

两种方法的其他指标评价，详见表2。

从易操度及劳动强度看，纸片法前期预制的培养基系统可省去大量繁琐准备工作，培养后仅对疑似菌落进行确认反应处理即可进行最终判定，与B-P平板计数法相比易操作且劳动强度小。B-P平板计数法需涂布琼脂平板培养48 h的实验流程，再对球菌菌落施行兔血浆凝固酶实验，手续繁琐且工作量大。

从计数准确度看，纸片法在接入菌液后，采用专用压板按压样液，可控制其均匀分布在计数格内，极少出现蔓延菌落生长现象。计数时仅需单位方格内的菌落与总方格数乘积即可实现。操作环节少了人为干预，流程作业标准，误差小。从检测时长看，纸片法接种后培养22～26 h，对实施确认反应片的菌落培养1～3 h，耗时不超过29 h；B-P平板计数检测法从接种培养到血浆凝固酶验证环节，所耗时长为72～96 h。前者极大缩短了检测时长[5]。

从培养基选择性看，纸片检测的60个样品中，可疑菌落较多，紫红色菌落相对较少。加确认片反应后，极少可疑菌落呈粉红色晕圈，故可判定这些黑色菌落基本为杂菌，这表明纸片法培养的了过多杂质，选择性差。

3 讨论

3.1 检测结果分析

根据统计分析表明，二者线性相关关系极为显著，并无明显差异且符合良好。二者在检测结果上并无实质差异，表现的一致性较好。两种方法的其他指标对比显示，纸片法的易操性、劳动强度、计数准确度及计数时长均优于B-P平板计数检测法。

3.2 两种检测法的劣势

二者的缺点均体现在对金黄色葡萄球菌的选择效果较弱，易受杂菌干扰所造成的判读难方面。纸片法判读过程中发现有些较深的紫红菌落与较浅的黑色菌落色系极为接近，很难分辨清楚，容易在视觉上产生颜色识别判定错误的问题。这一现象在肉类及速冻食品表现极为突出。这一点在早前的一些相关文献中可以得到证实。因此，需要进一步研发更具选择性的培养基是提升检测的准确性的紧要课题。

3.3 比较结果

尽管纸片法成本花费高，但随着科技的发展，国内也将能提供与国外纸片相媲美的低成本纸片，且由于纸片法的综合性与B-P平板计数检测法相比更易操作、省时省力，因此值得被广泛应用于未来实际检测行业及部门中。

[参考文献]

[1] 刘海卿，佘之蕴，陈丹玲，等.金黄色葡萄球菌三种定量检验方法的比较[J].食品研究与开发，2014（13）：113-115.

[2] 柳敦江.王鹏.一种快速鉴定猪舍空气样品中金黄色葡萄球菌的方法[J].猪业科学，2013（5）：96-97.

[3] 万婧，周向阳，张晓峰，等.双重PCR-DHPLC技术快速检测水产品中金黄色葡萄球菌[J].食品科学，2013（6）：119-203.

[4] 胡守奎，胡万富，撒楠.应用测试片法快速检测食品中的金黄色葡萄球菌[J].安徽预防医学杂志，2011（5）：45-46.

[5] 李环，刘威，邹大阳.基于颜色判定的DNA环介导恒温扩增法快速检测金黄色葡萄球菌[J].军事医学，2013（12）：104-105.

（收稿日期：2014-09-02）