HLA—G、HLA—E水平对卵巢恶性肿瘤免疫逃逸药物干预研究的影响
[摘要]目的：分析HLA-G、HLA-E水平对卵巢恶性肿瘤免疫逃逸药物干预研究的影响，为临床治疗提高参考。方法：培养卵巢癌细胞株，制备移植瘤模型，将裸鼠随机分为5组，分别给予天花粉蛋白、米非司酮、顺铂、联合用药和对照组。观察移植瘤体积拜年话，并检测HLA-G、HLA-E蛋白和mRNA表达情况。
结果：对照组移植瘤体积在（6103±1005）mm3，天花粉蛋白组移植瘤体积在（3502±520）mm3，米非司酮组移植瘤体积在（3685±1020）mm3，顺铂移植瘤体积在（3495±826）mm3，联合组移植瘤体积在（2532±764）mm3，各组移植瘤体积两两比较差异显著（P<0.05），与对照组比较，除顺铂组之外，移植瘤组织中HLA-C、HLA-E的mRNA光密度值和蛋白指数均显著下降，联合组下降情况更加明显。HLA-G（r=0.698）、HLA-E（r=O.462）mRNA表达与蛋白表达呈现正相关（P<0.05）。结论：米非司酮和天花粉蛋白能够降低肿瘤细胞中HLA-G、HLA-E水平，联合顺铂使用能够提高治疗效果。
[关键词]卵巢恶性肿瘤；免疫逃逸；HLA-G；HLA-E
[中图分类号]Q939.91 [文献标识码]A [文章编号]1672-5018（2016）12-145-01
肿瘤发生和发展过程中，肿瘤细胞与免疫系统相互影响制约。肿瘤细胞能够通过免疫逃逸现象得到增殖，近些年发现GLA-G、HLA-E传递强烈杀伤抑制信号，为分析HLA-G、HLA-E水平对卵巢恶性肿瘤免疫逃逸药物干预研究的影响，建立恶性肿瘤模型进行实验研究。
1资料和方法
1.1一般資料
选取BALMc裸鼠25只，均为雌性，卵巢癌细胞株来自河北医科大学，胎牛血清来自杭州四级青公司，引物来自上海生工生物公司。单克隆抗体来自Abeam公司。
1.2方法
SKOV3细胞培养采用含10%胎牛血清、链霉素和青霉素在恒温箱中培养，胰蛋白酶消化，2-3天传代一次。JEG-3细胞用含有胎牛血清、青霉素、培养液和链霉素培养，2-3天传代一次。
对数生长期细胞，调整细胞浓度，接种到培养板中，将细胞悬液接种到落实右侧肩胛背部，1周后成瘤。在接种第2周，裸鼠随机分为5组，对照组不做特殊处理。联合组给予米非司酮灌胃，同时腹腔注射顺铂3mg/kg，顺铂组腹腔注射顺铂3mg/kg，米非司酮组40mg/kg米非司酮灌胃，天花粉蛋白组腹腔注射4mg/kg天花粉蛋白。连续应用4周。
1_3观察指标
试验中观察落实活动、饮食等情况，给药3d后测量肿瘤体积，按照公式V=Hab2/6计算。移植瘤接种7周后处死裸鼠，取出移植瘤，细胞培养72h，采用Trizol试剂盒提取细胞总RNA，将等量RNA反转录为cDNA第1链，获得逆转录产物进行PCR，基因扩增，扩增条带采用凝胶法分析密度，相应基因表达量采用平均灰度值表示。蛋白相对含量采用荧光指数表示，大于1.0为阳性表达，小于1.0为阴性表达。
1.4统计学分析
采用MicrosoftExcel建立数据库，用SPSS19.0统计学软件进行数据分析。正态分布的计量资料用均数±标准差表示，两两比较采用t检验，双变量资料采用直线相关分析，P 2结果 2.1移植瘤生长情况 对照组移植瘤体积在（6103±1005）mm3，天花粉蛋白组移植瘤体积在（3502±520）mm3，米非司酮组移植瘤体积在（3685±1020）mm3，顺铂移植瘤体积在（3495±826）mm3，联合组移植瘤体积在（2532±764）mm3，两两比较差异显著（P<0.05）。 2.2HLA-G、HLA-E水平测定 与对照组比较，除顺铂组之外，移植瘤组织中HLA-C、HLA-E的mRNA光密度值和蛋白指数均显著下降，联合组下降情况更加明显。详见表1。 2.3相关性分析 HLA-G（1=-0.698）、HLA-E（r=-0.462）mRNA表达与蛋白表达呈现正相关（P<0.05）。 3讨论 从本组研究中可以看出天花粉蛋白移植瘤体积要显著低于对照组，同时HLA-G、HLA-E抗原mRNA、蛋白质也显著低于对照组，说明天花粉蛋白属于有效治疗药物之一。采用米非司酮以及顺铂联合治疗组下降情况更加明显，表明联合使用具有更强的抗癌作用。体外试验观察到米非司酮能够抑制卵巢癌细胞增殖，增强细胞对顺铂的敏感性。相关性分析显示HLA-G（r=0.698）、HLA-E（r=-0.462）mRNA表达与蛋白表达呈现正相关（P<0.05），可能是因为肿瘤细胞系HLA-G表达与肿瘤细胞存在不同。 总之，米非司酮和天花粉蛋白能够降低肿瘤细胞中HLA-G、HLA-E水平，联合顺铂使用能够提高治疗效果。
