显色培养基与SS培养基对从业人员肛拭标本及食品中沙门菌检测的对比分析
[摘要] 目的 对比分析显色培养基与SS培养基对从业人员肛拭标本及食品中沙门菌检测的灵敏性和特异性。 方法 将2 739份从业人员肛拭样品及297份食品增菌后分别接种显色培养基和SS培养基分离培养，结果进行对比分析。结果 2 739份肛拭样品中，显色培养基挑选紫色疑似菌落72 株，检出沙门菌15 株，SS培养基挑选疑似菌落43株，检出沙门菌17株，敏感性分别为88.24%和100.00%，特异性分别为97.91%和99.04%；297份食品中，显色培养基挑选紫色疑似菌落44株，检出沙门菌36株，SS培养基挑选疑似菌落42 株，检出沙门菌36株，敏感性均为100.00﹪，特异性分别为96.93%和97.70%。结论 SS培养适用于从业人员肛拭标本及基层大量的日常检测工作；显色培养基适用于食品及突发公共卫生事件的快速检测。实验室检测中，培养基的应用应根据检测样品的种类来选择。
[关键词] 沙门菌；显色培养基；SS培养基；肛拭标本；食品
[中图分类号] R155 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2016）01（b）-0095-03
[Abstract] Objective To compare the sensitivities and specificities of the chromogenic and the SS mediums in detecting salmonella from employees and food. Methods 2 739 employees’anal swab and 297 food samples were separately inoculated into the chromogenic and the SS mediums after pre-enrichment，and compared the sensitivities and specificities of salmonella in the two kinds of mediums. Results Among the 2 739 anal swab samples， 72 suspected colonies and 15 salmonella strains were found using the chromogenic mediums whereas the corresponding numbers for using the SS mediums were 43 and 17. Thus 88.24% vs 100.00%（sensitivities） and 96.10% vs 99.04%（specificities） were found respectively using the chromogenic and the SS mediums separately. Again， among the 297 food samples，44 suspected colonies and 36 salmonella strains were found using the chromogenic mediums whereas the corresponding numbers for using the SS mediums were 42 and 36.Thus 100.00% vs 100.00%（sensitivities） and 96.93% vs 99.04% （specificities） were found respectively using the chromogenic and the SS mediums separately. Conclusion SS mediums were preferred for the routine detections for the employees’anal swabs while the chromogenic mediums were preferred for the rapid detection in the public healthy emergency.And it depends on types of samples to choose the kind of mediums.
[Key words] Salmonella；Chromogenic medium；SS culture medium；Anal swab specimens；Food
沙门菌是肠杆菌科的重要致病菌属，也是引起细菌性食物中毒的主要致病菌之一[1]，对其分离目前常以对样品进行选择增菌后，使用选择性分离培养基进行病原菌分离鉴别。上世纪90 年代后期国外研发和应用了对特定菌酶底物的显色培养基[2]。许多学者研究表明显色培养基具有高敏感性和特异性，且具有操作简便、快速、易于识别等特点[3-5]。为对比显色培养基与SS 培养基在不同样品中检测沙门菌的敏感性和特异性，该文对该市公共场所及饮食行业从业人员2 739份肛拭样品及297份肉及其制品类食品样品，同时采用显色培养基和SS培养基进行沙门氏菌检测对比。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 标本来源 从业人员肛拭样品2 739份从泰州市2015年5—7月公共场所及饮食行业从业人员用无菌采便棒采集所得；肉及其制品类食品样品共297份从泰州市集贸市场和超市购买，置于2～8 ℃采集箱中于4 h内送实验室检验。
1.1.2 培养基、生化试剂及诊断血清 亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）、SS 琼脂、三糖铁琼脂及其他鉴定用的生化培养基均由北京路桥技术有限责任公司生产；沙门氏菌属诊断血清购自宁波天润生物药业有限公司；科玛嘉沙门氏菌显色培养基由郑州博赛生物科技股份有限公司提供；VITEK2革兰氏阴性细菌鉴定卡购自法国梅里埃公司。所有培养基、试剂及诊断血清均在有效期内使用。
1.1.3 检测仪器 法国梅里埃公司VITEK2全自动微生物分析系统。
1.2 方法
1.2.1 肛拭样品的增菌、分离培养 依据国标WS 271-2007《感染性腹泻诊断标准》，将采集的肛拭子标本放入SC增菌液中，36 ℃24 h增菌培养后，用接种环分别取增菌液一环，划线接种于SS平板和显色平板，于36 ℃培养24 h。
1.2.2 食品样品的增菌、分离培养参照GB4789.4—2010《食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》的方法，称取25 g（mL）样品放入盛有225 mL的无菌均质杯中前增菌，移取1 mL混合物转种于10mLSC增菌液内，36 ℃ 24 h增菌培养后，用接种环分别取增菌液一环，划线接种于SS平板和显色平板，于36 ℃培养24 h。
1.2.3 菌株的筛选 在SS培养基上挑取无色半透明、中等大小、圆形扁平、边缘光滑中心带黑色的菌落；在显色培养基上按说明挑取颜色为紫色的菌落。
1.2.4 菌株的鉴定 将两种分离琼脂平板上挑取的疑似菌落分别接种肠道鉴别生化管，初筛符合者（甘露醇+、葡萄糖+、尿素-、蔗糖-、动力+、电基质-、硫化氢+）用VITEK2全自动微生物分析系统进行鉴定，对鉴定为沙门氏菌的菌株用沙门氏菌属诊断血清进行玻片凝集实验判定结果。
2 结果
2.1 从业人员肛拭样品检测结果对比
2 739份肛拭样品中，沙门氏菌显色培养基挑选紫色疑似菌落72株，检出沙门菌15株，假阳性菌落经鉴定主要为非发酵菌（铜绿假单胞菌、嗜麦牙寡养食单胞菌和施氏假单胞菌）；SS培养基挑取疑似菌株43株，检出沙门菌17株，假阳性菌落经鉴定为变形杆菌、粘质沙雷氏菌、产碱普罗威登斯菌和杨氏柠檬酸杆菌。敏感性分别为88.24%和100.00%，特异性分别为97.91%和99.04%，见表1。
2.2 食品样品检测结果对比
297份食品中，显色培养基挑选紫色菌落44株，检出沙门菌36株，假阳性菌落经鉴定为铜绿假单胞菌和施氏假单胞菌；SS培养基挑选疑似菌落42株，检出沙门菌36株，假阳性菌落经鉴定为变形杆菌和弗氏柠檬酸杆菌。敏感性均为100%，特异性分别为96.93%和97.70%，见表2。
3 讨论
用显色培养基鉴定微生物是一种新的微生物快速检验技术，该技术以生化反应为基础，通过在培养基中加入细菌特异性酶的显色底物，直接根据菌落颜色对菌种做出鉴定[6]。相比较传统的培养基，显色培养基快速，灵敏，高效，在我国现行的食品安全卫生标准中，已引入多种显色培养基作为分离培养基[7]，显色培养基开始逐渐进入我国的食品卫生标准。但本次实验表明：科玛嘉显色培养基在检测从业人员肛拭标本时，并没有有效地提高检测效率。
由表1可以看出，对从业人员肛拭样品的对比实验中，SS培养基的敏感性和特异性明显高于科玛嘉显色培养基，原因可能是肛拭样品中杂菌较多，污染量大，且嗜水气单胞菌和铜绿假单胞菌等非发酵菌可能存在与沙门菌相同的酶，在显色培养基上也呈现紫色，表现出与沙门氏菌相同的性状而无法区别，这样大量的非发酵菌所表现出的假阳性，干扰了目标菌的检测，造成筛选效率过低，从而影响了显色培养基检测的敏感性、特异性。而SS培养基为强选择性培养基，能较强的抑制肠道非病原细菌及大肠杆菌的生长，故在检测此类样品时，选用抑制性较强的SS培养基为好。
由表2可以看出，食品样品的对比实验中，科玛嘉显色培养基与SS培养基检测结果显示，二者的敏感性都是100%，特异性也无显著性差异，原因可能是食品相对比较干净，杂菌少，干扰小。但是，在对食品样品的检测过程中，传统的鉴定方法首先都要进行纯培养，再将细菌鉴定至种，一般需要72～120 h，耗时较长。而显色培养基最大的优点是省去了对菌株进行纯培养的步骤，可以直接通过菌落颜色对菌株进行分离和初步鉴别，实验室检测的过程中，可将点种沙门菌显色培养基与三糖铁结合起来，这一过程一般只需要48～72 h，缩短了检测周期，效率得到了提升，且操作简单，无需其他特殊仪器，此方法为实验室快速检测时，能及时给出检测报告提供了可能。故在食品及突发公共卫生事件的检验中建议使用显色培养基进行沙门菌检验。
该次试验表明SS选择性培养基在从业人员肛拭标本的沙门菌检测中，敏感性、特异性明显高于显色培养基，并且使用成本大大低于显色培养基，适合基层大量的日常检测工作；显色培养基是近年来开发的新型快速检测技术，适合食品及突发公共卫生事件的快速检测。所以在实验室检测中，培养基的应用应根据样品的种类甄别选择。
[参考文献]
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（收稿日期：2015-10-13）
