miR—200b在胃癌中的表达及其临床意义

【摘要】目的检测miR-200b在胃癌（GC）细胞和组织中的表达，探讨miR-200b的异常表达与胃癌发生、发展的关系及其临床意义。方法实时定量PER法检测miR-200b在胃癌细胞株及活检组织及相应癌旁正常组织中mRNA表达水平的差异，并分析其与胃癌的临床病理因素的关系。结果在胃癌组织中miR-200b mRNA表达水平显著低于正常胃黏膜组织；此外，miR-200b的表达水平与胃癌分化程度、浸润深度以及远处转移呈正相关性（P<0.05）。结论miR-200b在胃癌中低表达，其表达水平与胃癌进展密切相关，可作为预测胃癌进展和转移的分子标记物之一。

【关键词】胃癌；miR-200b；表达；分子标记

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，全世界排名第四位。胃癌的发生是一个复杂的多步骤的过程，包括上皮细胞的异常增生，凋亡自然程序的紊乱，异常分化等GC。近些年来，随着临床早期诊断和治疗方法的改进，早期胃癌患者的生存率要明显高于晚期胃癌患者。然而，胃癌的整体生存率仍然很低。传统的治疗方法已经不能准确预测胃癌患者的预后，因此，发现和研究有效的、具有潜在价值的新的标志物对于胃癌的预后评估具有重要意义。

微小RNA（microRNA或者miRs）是一种小的非编码RNA，它能在转录后水平上调节基因表达。microRNA在肿瘤的发生发展中具有重要的作用。研究显示，它通过靶定癌基因或肿瘤抑癌基因，参与了肿瘤的凋亡，增殖，分化，发挥着类似肿瘤抑制因子或癌基因的作用。已经有文献报道显示miR-200b参与一些肿瘤的增殖、凋亡和周期，如乳腺癌，肝癌，卵巢癌，宫颈癌，肺癌等，但在胃癌中尚未有相关的研究报道。因此这篇文章主要研究miR-200b在胃癌中的表达情况。

1材料与方法

1.1材料收集乐山市人民医院手术切除的58对新鲜的胃癌组织和癌旁正常肠黏膜组织置于液氮中保存备用，其中男性33例，女性25例；年龄23～67岁，平均年龄57.5岁。反转录试剂盒（Takara公司），Trizol、SYBR GREEN MIX（Toyobo公司），

1.2方法实时定量PCR采用Trizol裂解相应的组织和细胞，按常规方法提取RNA，测其浓度，按照miRNA反转录试剂盒说明书反转录成cDNA后，采用特异的引物扩增，进行实时定量PCR检测。U6基因作为参照基因，反应条件50%2 min，95°C10 min预变性，95°C15 s，60cc 1min，72℃34s，30个循环，反应结束后得ct值。根据公式26[（ctof miR-200b）一（ct of GAPD H）计算目的基因相对含量，实验重复3次。miR在胃癌组织中N/T值>2为高表达，0-2为低表达。

1.3统计学分析采用SPSS20.0进行数据分析，miR-200b的mRNA表达水平和临床病理因素的相关眭采用WilcoxonSignedRanks检验分析和Spearman相关分析。

2结果

2.1.在细胞及胃癌组织中的检测miR-200b在GSE（永生化胃正常上皮细胞株1中含量最高，在6株胃癌细胞株中，miR-200b在转移能力较低的AGS中水平最高，在转移能力较强的SGC中含量最低（图1）。miR-200b在58例配对组织中，mRNA水平上，CRC组织中miR-200b的表达水平要低于正常胃黏膜组织中的表达量，P值为0.0012，具有统计学差异。其中有43例CRC组织中miR-200b蛋白的表达显著低于正常黏膜组织，15例高于正常黏膜组织（图2）。

2.2胃癌组织中miR-200b mRNA含量与临床病理参数的关系癌组织中miR-200b含量高低与胃癌分化程度、是否有远处转移、淋巴结转移相关，（均P<0.05），而与肿瘤患者的性别、年龄、浸润深度无关（P>0.05）（表1）。结果显示，癌组织中miR-200b含量越低，肿瘤分化程度越低，有远处转移和淋巴节转移的患者癌组织中miR-200b含量要低于无远处转移患者。

3讨论

本文我们主要探讨了miR-200b在胃癌中的作用。miR-200b，作为微小非编码RNA的一种，和其他大多数的miRNAs一样，在疾病的发生发展中具有重要的作用。它的高表达能促进瘢痕的增生、能调节EB病毒的潜伏及溶解复制。而在肿瘤的演进过程中miR-200b也发挥着重要的作用。目前为止，仅有几篇文章报道miR-200b在肿瘤中的作用，在胃癌中尚未报道。在这篇文章中，我们首先检测了miRNA在正常的胃上皮细胞株GSE和6株胃癌细胞株中的含量。检测发现miR-200b在正常的胃上皮细胞中含量最高，在胃癌细胞株中，在转移能力较强的细胞中含量相对较低，转移能力較低的细胞中含量较高。这一结果初步证明，miR-200b在胃癌中的含量高低与转移相关。随后，我们在58例配对的胃癌新鲜组织中检测了miR-200b的含量。我们发现，正常胃粘膜上皮中miR-200b的含量明显高于胃癌组织中的含量，P值小于0.001，且miR-200b在癌组织中的含量的高低与胃癌的分化程度、淋巴结转移和远处转移相关。

以上结果显示，miR-200b与胃癌的转移是密切相关的。但其参与胃癌转移的作用机制尚不清楚。众所周知，microRNA能通过靶定癌基因或肿瘤抑癌基因，调节其转录后的蛋白水平，发挥着类似肿瘤抑制因子或癌基因的作用，参与肿瘤的凋亡、增殖、分化和转移。有研究报道显示，miR-200b能够靶向作用于ZEB2抑制胶质瘤的生长和转移。它还能够通过靶向作用于FSCN1抑制非小细胞肺癌的侵袭和转移。另外，miR-200b还能靶向作用于RhoE抑制宫颈癌细胞的上皮向间质转化和转移，除此之外，miR-200b还能通过抑制其启动子或DNA的甲基化来抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭、转移。这些研究机制在我们下一步研究阐述miR-200b在胃癌中的作用机制中有很重要的参考价值。

综上所述，本实验结果表明，miR-200b在胃癌肿瘤组织中低表达，其表达水平在肿瘤分化程度、淋巴结转移和远处转移的病例中有差异，且呈负相关关系，故其可能参与结直肠癌的发生、进展和转移。本研究为miR-200b在胃癌肿瘤转移分子标证物提供了理论依据，也为结胃癌的治疗提供一个新的思路。